在数字PCR(dPCR)分析软件(如 Bio-Rad 的 QuantaSoft、RainDrop Analyst、Stilla 的 Crystal Miner 或 NIO Detection 等)中,**Analyzable droplets(可分析液滴)和Saturated objects(饱和目标)**是评估实验质量的重要指标。
你看到的数据:
- Nb Analyzable droplets = 15025
- Nb Saturated Objects = 2686
一、Analyzable droplets 的意义
**Nb Analyzable droplets(可分析液滴数)**指的是在整个图像中被软件识别并能够用于定量分析的液滴总数。
- 通常建议:每孔不少于 10,000 个 analyzable droplets,越多越好。
- 你目前是 15025,这是个良好甚至偏高的数量,合格无疑。
二、Saturated Objects 的意义
**Saturated Objects(饱和目标)**通常指亮度/荧光信号超出动态范围的液滴或目标,它们:
- 可能由于荧光过强或图像曝光过度,导致无法准确读取;
- 不一定是坏液滴,但通常会被排除在分析之外。
合格标准(参考):
- 饱和目标数 < 总 analyzable droplets 的 20% 较为理想;
- 更严格一些的文献或指南中建议 <10%。
你目前:
- 饱和目标 = 2686
- 占比 = 268615025≈17.86%\frac{2686}{15025} \approx 17.86\%150252686≈17.86%
所以从数值来看:
✅ 在允许范围内,但略偏高
⚠️ 建议留意是否有曝光过度或探针浓度偏高的问题
三、是否合格结论
| 项目 | 数值 | 建议标准 | 是否合格 |
|---|---|---|---|
| Analyzable Droplets | 15025 | >10000 | ✅ 合格 |
| Saturated Objects | 2686 | <10~20% of analyzable | ⚠️ 合格但偏高 |
四、建议
- 查看原始图像或热图:看看是否有局部亮度过曝;
- 调整荧光通道或曝光时间(若适用);
- 如长期稳定偏高,可考虑:
- 降低探针浓度;
- 减少PCR循环数;
- 检查仪器或图像处理参数。