PCR质量控制

在数字PCR(dPCR)分析软件(如 Bio-Rad 的 QuantaSoft、RainDrop Analyst、Stilla 的 Crystal Miner 或 NIO Detection 等)中,**Analyzable droplets(可分析液滴)Saturated objects(饱和目标)**是评估实验质量的重要指标。


你看到的数据:

  • Nb Analyzable droplets = 15025
  • Nb Saturated Objects = 2686

一、Analyzable droplets 的意义

**Nb Analyzable droplets(可分析液滴数)**指的是在整个图像中被软件识别并能够用于定量分析的液滴总数。

  • 通常建议:每孔不少于 10,000 个 analyzable droplets,越多越好。
  • 你目前是 15025,这是个良好甚至偏高的数量合格无疑

二、Saturated Objects 的意义

**Saturated Objects(饱和目标)**通常指亮度/荧光信号超出动态范围的液滴或目标,它们:

  • 可能由于荧光过强或图像曝光过度,导致无法准确读取;
  • 不一定是坏液滴,但通常会被排除在分析之外

合格标准(参考):

  • 饱和目标数 < 总 analyzable droplets 的 20% 较为理想;
  • 更严格一些的文献或指南中建议 <10%。

你目前:

  • 饱和目标 = 2686
  • 占比 = 268615025≈17.86%\frac{2686}{15025} \approx 17.86\%150252686​≈17.86%

所以从数值来看:
在允许范围内,但略偏高
⚠️ 建议留意是否有曝光过度或探针浓度偏高的问题


三、是否合格结论

项目数值建议标准是否合格
Analyzable Droplets15025>10000✅ 合格
Saturated Objects2686<10~20% of analyzable⚠️ 合格但偏高

四、建议

  1. 查看原始图像或热图:看看是否有局部亮度过曝;
  2. 调整荧光通道或曝光时间(若适用);
  3. 如长期稳定偏高,可考虑:
    • 降低探针浓度;
    • 减少PCR循环数;
    • 检查仪器或图像处理参数。

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